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  • 小鼠白細胞介素-2ELISA試劑盒
產(chǎn)品名稱:

小鼠白細胞介素-2ELISA試劑盒

產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-08-02
Solarbio (Solarbio ®)小鼠白細胞介素-2ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗小鼠IL-2單克隆抗體包被在酶標板上;分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本,標準品和樣本中的小鼠IL-2會與酶標板上的包被抗體充分結(jié)合

產(chǎn)品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶貨號SEKM0004
規(guī)格48T/96T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途小鼠白細胞介素-2含量測定應用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)

小鼠白細胞介素-2ELISA試劑盒

 

背景介紹:

    白細胞介素2(IL-2)是一種在機體免疫應答中扮演重要角色的多效性細胞因子。其于1976年被Morgan在小鼠脾細胞培養(yǎng)上清中發(fā)現(xiàn),由于它能很好地促進和維持T細胞長期培養(yǎng), 故將其稱之為為T細胞生長因子,1979年統(tǒng)一命名為IL-2。小鼠IL-2含有133個氨基酸殘基,分子量為15.5kDa。IL-2重要的作用是誘導T淋巴細胞增殖和分化,此外,IL-2還可調(diào)節(jié)多種細胞的免疫應答。在體內(nèi),IL-2有抗腫瘤、抗微生物感染、引起移植排斥和自身免疫以及免疫調(diào)節(jié)等作用。

 

檢測原理

    Solarbio (Solarbio ®)ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗小鼠IL-2單克隆抗體包被在酶標板上;分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本,標準品和樣本中的小鼠IL-2會與酶標板上的包被抗體充分結(jié)合;洗板后加入生物素化抗小鼠IL-2抗體,該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標準品和樣本中的小鼠IL-2發(fā)生特異性結(jié)合;洗板后加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素,生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結(jié)合;洗板后加入顯色劑底物TMB,若反應孔中樣品存在不同濃度的小鼠IL-2,則HRP會使無色TMB變成不同深淺(正相關(guān))的藍色物質(zhì),加入終止液后反應孔會變成黃色;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應孔樣品吸光度(OD),樣本中的小鼠IL-2濃度與OD成正比,通過繪制標準曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計算出樣本中小鼠IL-2的濃度。

 

原理圖: 

 

 

注意事項:※※※

  • 試劑盒應在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
  • 試劑盒未使用時應保存在2-8℃冰箱,已復溶但未用完的標準品,請丟棄。
  • 試劑盒使用前請在室溫恢復30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
  • 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測,且加入試劑的順序應保持*。
  • 為避免交叉污染,請在試驗中使用1次性試管,槍頭,封板膜()及潔凈塑料容器。.
  • 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶 

蓋上,使用前請離心處理(5-10 S即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。

  • 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試

劑代替本試劑盒中的某單個組分。

  • 為保證結(jié)果準確,每次檢測均需做標準曲線。

 

安全提示:試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時請帶上手套并注意防護;在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時,請按國家生物實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

 

試劑盒組成及儲存

試劑盒組成

規(guī)格(96T)

規(guī)格(48T)

保存條件

抗體預包被酶標板

 

8*12

8*6

2-8

標準品

2支

1支

-20

標準品/樣本稀釋液(SR1)

16 ml/瓶

8 ml/瓶

2-8

濃縮生物素化抗體

120 ul(100X)

60 ul(100X)

2-8

抗體稀釋液(SR2)

16 ml/瓶

8 ml/瓶

2-8

濃縮酶結(jié)合物(避光)

120 ul(100X)

60 ul(100X)

2-8

酶結(jié)合物稀釋液(SR3)

16 ml/瓶

8 ml/瓶

2-8

濃縮洗滌液 (20×)

30 ml/瓶

15 ml/瓶

2-8

顯色底物(避光)

12 ml/瓶

6 ml/瓶

2-8

終止液

12 ml/瓶

6 ml/瓶

2-8

封板膠紙

4張

2張

 

說明書

1份

1份

 

 

 

自備實驗器材(不提供,可代購)

  • 酶標儀(主波長450nm,參考波長630nm)
  • 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
  • 洗板機或洗瓶
  • 37℃孵育箱
  • 雙蒸水,去離子水,量筒等
  • 稀釋用聚丙烯試管

 

 

樣本收集及儲存:

  • 細胞培養(yǎng)上清:

將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存),避免反復凍融。

  • 血清樣本:

室溫血液自然凝固20 min后,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存),保存過程中如有沉淀,請再次離心,避免反復凍融。

  • 血漿樣本:

將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標本的實際要求選擇EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合20 min,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存),避免反復凍融。

 

注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結(jié)果;如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的高值,請將樣品做適當倍數(shù)稀釋后檢測,建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數(shù)。

 

 

試劑準備

  • 試劑回溫:先在實驗前30 min將試劑盒,待測樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。
  • 配制洗滌液:預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將20倍濃縮洗滌液稀釋成1倍應用液,未用完的濃縮洗滌液放入4℃冰箱保存。

3. 標準品梯度稀釋:加入標準品/樣本稀釋液(SR1)1ml凍干標準品中,靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為1000pg/ml),然后按照以下濃度:1000、 500、 250、125、62.5、31.25、15.625、 0 pg/ml進行稀釋。復溶過的標準品原液(1000pg/ml)未用完的應廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~-80℃冰箱,具體如下圖。

 

4. 生物素化抗體工作液:預先計算好試驗所需用量,用檢測稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應用工作液(稀釋前充分混勻),請在30分鐘內(nèi)加入到反應孔中。

生物素化抗體工作液具體稀釋方法如下:

板條

濃縮生物素化抗體(1:100):μL

檢測稀釋液(SR2):μL

2

20

1980

4

40

3960

6

60

5940

8

80

7920

10

100

9900

12

120

11880

 

5. 酶結(jié)合物工作液:按每次試驗所需用量配制,用酶結(jié)合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1倍應用工作液(稀釋前離心),請在30分鐘內(nèi)使用。

酶結(jié)合物工作液具體稀釋方法如下:

板條

濃縮酶結(jié)合物(1:100):μL

檢測稀釋液(SR3):μL

2

20

1980

4

40

3960

6

60

5940

8

80

7920

10

100

9900

12

120

11880

 

6. 洗滌方法:

  • 自動洗板:甩盡酶標板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為300ul/孔,注與吸出間隔為30秒,洗板5次。
  • 手工洗板:甩盡酶標板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液300ul/孔,靜止30秒后甩凈酶標板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板5次。

 

檢測步驟:

 

結(jié)果判斷

1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測,參考波長為 630 nm。如不能進行雙波長檢測,請用 450 nm 的OD測定值減去630 nm的OD測定值。

2.計算標準品、樣品的平均OD值:每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值

3.以標準品濃度為橫坐標,吸光度OD值為縱坐標,用軟件繪制標準曲線,樣品中IL-2含量可通過對應OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

4.若標本OD值高于標準曲線上限,應做適當稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。

 

參數(shù)表征

 

1. 數(shù)據(jù)及標準曲線

 

標準品濃度(pg/ml)

OD值1

OD值2

平均值

矯正值

0

0.071

0.073

0.072

---

15.625

0.116

0.120

0.118

0.046

31.25

0.261

0.225

0.243

0.171

62.5

0.352

0.379

0.365

0.293

125

0.508

0.486

0.497

0.425

250

0.852

0.826

0.839

0.767

500

1.436

1.458

1.447

1.375

1000

2.426

2.503

2.464

2.392

 

本圖僅供參考,應以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算小鼠IL-2的樣本含量

 

 

2. 靈敏度:

低可檢測小鼠IL-2濃度達7pg/ml,

20個零標準品濃度OD的平均值加上兩個標準差,計算相應的可檢測濃度。

 

3. 特異性:

不與小鼠IL-2、4、6、8、10反應,大鼠IL-2、4、6、8等反應

 

4. 重復性:

板內(nèi),板間變異系數(shù)<10%

 

5. 回收率:

在選取的健康小鼠血漿、細胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的小鼠 IL-2,計算回收率。

樣本類型

平均回收率(%)

范圍(%)

血漿

85

82-106

細胞培養(yǎng)上清

93

90-104

 

 

6. 線性稀釋

分別在選取的4 份健康小鼠血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 IL-2,在標準曲線動力學范圍內(nèi)進行稀釋,評估線性。

稀釋比例

回收率(%)

血漿

細胞培養(yǎng)上清

1:2

平均回收率(% )

93

105

范圍(%)

82-99

90-109

1:4

平均回收率(% )

92

108

范圍(%)

86-103

95-114

1:8

平均回收率(% )

103

96

范圍(%)

92-111

91-102

1:16

平均回收率(% )

102

104

范圍(%)

89-104

86-117

 

 

 

參考文獻

1. Yokota, T. et al. (1985) Proc. Natl. Acd. Sci. USA 82:68.

2. Kashima, N. et al. (1985) Nature 313:401.

3. Fuse, A. et al. (1984) Nucl. Acids Res. 12:9323.

4. Thomas, R. et al. (2003)J Leukocyte Bio. 961-965

5. Bronte, V. et al. (1995) J. Immunol.5282-5292

6. Yokota, T. et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:68.

7. Kashima, N. et al. (1985) Nature 313:401.

 

 

常見問題及解決方法

問題

可能原因

解決方法

 

 

高背景或陰性對照值偏高

洗板不充分

將洗滌液注入反應孔充分洗滌,*拍干孔中液體

酶結(jié)合物過量

檢查酶稀釋度,按說明書標識的稀釋度稀釋

底物污染

加底物前檢查底物是否為透明無色,請勿用變藍的底物,重新用新的底物試驗

陰性對照孔被陽性對照污染

注意洗滌時不要把洗液溢出孔外,不使陰陽對照孔液體漣接一起

不同批次試劑混用

檢查試劑批號,請勿用不同批次試劑

 

 

 

顯色信號弱

試劑過期

檢查試劑盒有效期,請勿用過期試劑

孵育時間過短

按說明書中規(guī)定的時間孵育

試劑污染

檢查試劑是否污染,請勿用污染的試劑

酶標儀濾光片不匹配

檢查酶標儀設置及濾光片是否匹配

試劑盒平衡不充分

確保試劑盒試驗前平衡室溫

顯色時間不夠

增加底物顯色時間

 

 

無顯色信號

檢測抗體、酶、或顯色劑漏加

檢查試驗操作流程,重復試驗

酶被疊氮鈉污染

請使用重新配制的試劑

試劑添加順序有誤

檢查復核試驗添加順序、流程,重復試驗

標曲佳但樣品孔無信號

樣品中靶標物含量低或樣品中無靶標物

設置陽性對照,重復實驗

樣品基質(zhì)效應影響檢測

重新稀釋樣品后復測

標曲佳但樣品信號偏高

樣品中待檢物含量超過標準曲線范圍

重新稀釋樣品后復測

邊緣效應

孵育溫度不均衡

孵育時每步均使用新的封板膠紙,避免在環(huán)境溫度變化大的地方孵育,勿疊放反應板

 

小鼠白細胞介素-2ELISA試劑盒訂購說明:

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預訂,海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當日新價格為準。 
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后,將底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。


ELISA試劑盒運輸說明:

極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。

 

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