品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | 貨號 | SEKM0004 |
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規(guī)格 | 48T/96T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 小鼠白細胞介素-2含量測定 | 應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
小鼠白細胞介素-2ELISA試劑盒
背景介紹:
白細胞介素2(IL-2)是一種在機體免疫應答中扮演重要角色的多效性細胞因子。其于1976年被Morgan在小鼠脾細胞培養(yǎng)上清中發(fā)現(xiàn),由于它能很好地促進和維持T細胞長期培養(yǎng), 故將其稱之為為T細胞生長因子,1979年統(tǒng)一命名為IL-2。小鼠IL-2含有133個氨基酸殘基,分子量為15.5kDa。IL-2重要的作用是誘導T淋巴細胞增殖和分化,此外,IL-2還可調(diào)節(jié)多種細胞的免疫應答。在體內(nèi),IL-2有抗腫瘤、抗微生物感染、引起移植排斥和自身免疫以及免疫調(diào)節(jié)等作用。
檢測原理:
Solarbio (Solarbio ®)ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗小鼠IL-2單克隆抗體包被在酶標板上;分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本,標準品和樣本中的小鼠IL-2會與酶標板上的包被抗體充分結(jié)合;洗板后加入生物素化抗小鼠IL-2抗體,該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標準品和樣本中的小鼠IL-2發(fā)生特異性結(jié)合;洗板后加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素,生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結(jié)合;洗板后加入顯色劑底物TMB,若反應孔中樣品存在不同濃度的小鼠IL-2,則HRP會使無色TMB變成不同深淺(正相關(guān))的藍色物質(zhì),加入終止液后反應孔會變成黃色;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應孔樣品吸光度(OD),樣本中的小鼠IL-2濃度與OD成正比,通過繪制標準曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計算出樣本中小鼠IL-2的濃度。
原理圖:
注意事項:※※※
蓋上,使用前請離心處理(5-10 S即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
劑代替本試劑盒中的某單個組分。
安全提示:試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時請帶上手套并注意防護;在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時,請按國家生物實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。
試劑盒組成及儲存:
試劑盒組成 | 規(guī)格(96T) | 規(guī)格(48T) | 保存條件 |
抗體預包被酶標板
| 8*12 | 8*6 | 2-8℃ |
標準品 | 2支 | 1支 | -20 ℃ |
標準品/樣本稀釋液(SR1) | 16 ml/瓶 | 8 ml/瓶 | 2-8℃ |
濃縮生物素化抗體 | 120 ul(100X) | 60 ul(100X) | 2-8℃ |
抗體稀釋液(SR2) | 16 ml/瓶 | 8 ml/瓶 | 2-8℃ |
濃縮酶結(jié)合物(避光) | 120 ul(100X) | 60 ul(100X) | 2-8℃ |
酶結(jié)合物稀釋液(SR3) | 16 ml/瓶 | 8 ml/瓶 | 2-8℃ |
濃縮洗滌液 (20×) | 30 ml/瓶 | 15 ml/瓶 | 2-8℃ |
顯色底物(避光) | 12 ml/瓶 | 6 ml/瓶 | 2-8℃ |
終止液 | 12 ml/瓶 | 6 ml/瓶 | 2-8℃ |
封板膠紙 | 4張 | 2張 |
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說明書 | 1份 | 1份 |
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自備實驗器材(不提供,可代購)
樣本收集及儲存:
將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存),避免反復凍融。
室溫血液自然凝固20 min后,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存),保存過程中如有沉淀,請再次離心,避免反復凍融。
將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標本的實際要求選擇EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合20 min,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存),避免反復凍融。
※注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結(jié)果;如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的高值,請將樣品做適當倍數(shù)稀釋后檢測,建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數(shù)。
試劑準備:
3. 標準品梯度稀釋:加入標準品/樣本稀釋液(SR1)1ml凍干標準品中,靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為1000pg/ml),然后按照以下濃度:1000、 500、 250、125、62.5、31.25、15.625、 0 pg/ml進行稀釋。復溶過的標準品原液(1000pg/ml)未用完的應廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~-80℃冰箱,具體如下圖。
4. 生物素化抗體工作液:預先計算好試驗所需用量,用檢測稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應用工作液(稀釋前充分混勻),請在30分鐘內(nèi)加入到反應孔中。
生物素化抗體工作液具體稀釋方法如下:
板條 | 濃縮生物素化抗體(1:100):μL | 檢測稀釋液(SR2):μL |
2 | 20 | 1980 |
4 | 40 | 3960 |
6 | 60 | 5940 |
8 | 80 | 7920 |
10 | 100 | 9900 |
12 | 120 | 11880 |
5. 酶結(jié)合物工作液:按每次試驗所需用量配制,用酶結(jié)合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1倍應用工作液(稀釋前離心),請在30分鐘內(nèi)使用。
酶結(jié)合物工作液具體稀釋方法如下:
板條 | 濃縮酶結(jié)合物(1:100):μL | 檢測稀釋液(SR3):μL |
2 | 20 | 1980 |
4 | 40 | 3960 |
6 | 60 | 5940 |
8 | 80 | 7920 |
10 | 100 | 9900 |
12 | 120 | 11880 |
6. 洗滌方法:
檢測步驟:
結(jié)果判斷:
1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測,參考波長為 630 nm。如不能進行雙波長檢測,請用 450 nm 的OD測定值減去630 nm的OD測定值。
2.計算標準品、樣品的平均OD值:每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值
3.以標準品濃度為橫坐標,吸光度OD值為縱坐標,用軟件繪制標準曲線,樣品中IL-2含量可通過對應OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
4.若標本OD值高于標準曲線上限,應做適當稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。
參數(shù)表征:
1. 數(shù)據(jù)及標準曲線
標準品濃度(pg/ml) | OD值1 | OD值2 | 平均值 | 矯正值 |
0 | 0.071 | 0.073 | 0.072 | --- |
15.625 | 0.116 | 0.120 | 0.118 | 0.046 |
31.25 | 0.261 | 0.225 | 0.243 | 0.171 |
62.5 | 0.352 | 0.379 | 0.365 | 0.293 |
125 | 0.508 | 0.486 | 0.497 | 0.425 |
250 | 0.852 | 0.826 | 0.839 | 0.767 |
500 | 1.436 | 1.458 | 1.447 | 1.375 |
1000 | 2.426 | 2.503 | 2.464 | 2.392 |
本圖僅供參考,應以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算小鼠IL-2的樣本含量
2. 靈敏度:
低可檢測小鼠IL-2濃度達7pg/ml,
20個零標準品濃度OD的平均值加上兩個標準差,計算相應的可檢測濃度。
3. 特異性:
不與小鼠IL-2、4、6、8、10反應,大鼠IL-2、4、6、8等反應
4. 重復性:
板內(nèi),板間變異系數(shù)<10%
5. 回收率:
在選取的健康小鼠血漿、細胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的小鼠 IL-2,計算回收率。
樣本類型 | 平均回收率(%) | 范圍(%) |
血漿 | 85 | 82-106 |
細胞培養(yǎng)上清 | 93 | 90-104 |
6. 線性稀釋:
分別在選取的4 份健康小鼠血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 IL-2,在標準曲線動力學范圍內(nèi)進行稀釋,評估線性。
稀釋比例 | 回收率(%) | 血漿 | 細胞培養(yǎng)上清 |
1:2 | 平均回收率(% ) | 93 | 105 |
范圍(%) | 82-99 | 90-109 | |
1:4 | 平均回收率(% ) | 92 | 108 |
范圍(%) | 86-103 | 95-114 | |
1:8 | 平均回收率(% ) | 103 | 96 |
范圍(%) | 92-111 | 91-102 | |
1:16 | 平均回收率(% ) | 102 | 104 |
范圍(%) | 89-104 | 86-117 |
參考文獻:
1. Yokota, T. et al. (1985) Proc. Natl. Acd. Sci. USA 82:68.
2. Kashima, N. et al. (1985) Nature 313:401.
3. Fuse, A. et al. (1984) Nucl. Acids Res. 12:9323.
4. Thomas, R. et al. (2003)J Leukocyte Bio. 961-965
5. Bronte, V. et al. (1995) J. Immunol.5282-5292
6. Yokota, T. et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:68.
7. Kashima, N. et al. (1985) Nature 313:401.
常見問題及解決方法:
問題 | 可能原因 | 解決方法 |
高背景或陰性對照值偏高 | 洗板不充分 | 將洗滌液注入反應孔充分洗滌,*拍干孔中液體 |
酶結(jié)合物過量 | 檢查酶稀釋度,按說明書標識的稀釋度稀釋 | |
底物污染 | 加底物前檢查底物是否為透明無色,請勿用變藍的底物,重新用新的底物試驗 | |
陰性對照孔被陽性對照污染 | 注意洗滌時不要把洗液溢出孔外,不使陰陽對照孔液體漣接一起 | |
不同批次試劑混用 | 檢查試劑批號,請勿用不同批次試劑 | |
顯色信號弱 | 試劑過期 | 檢查試劑盒有效期,請勿用過期試劑 |
孵育時間過短 | 按說明書中規(guī)定的時間孵育 | |
試劑污染 | 檢查試劑是否污染,請勿用污染的試劑 | |
酶標儀濾光片不匹配 | 檢查酶標儀設置及濾光片是否匹配 | |
試劑盒平衡不充分 | 確保試劑盒試驗前平衡室溫 | |
顯色時間不夠 | 增加底物顯色時間 | |
無顯色信號 | 檢測抗體、酶、或顯色劑漏加 | 檢查試驗操作流程,重復試驗 |
酶被疊氮鈉污染 | 請使用重新配制的試劑 | |
試劑添加順序有誤 | 檢查復核試驗添加順序、流程,重復試驗 | |
標曲佳但樣品孔無信號 | 樣品中靶標物含量低或樣品中無靶標物 | 設置陽性對照,重復實驗 |
樣品基質(zhì)效應影響檢測 | 重新稀釋樣品后復測 | |
標曲佳但樣品信號偏高 | 樣品中待檢物含量超過標準曲線范圍 | 重新稀釋樣品后復測 |
邊緣效應 | 孵育溫度不均衡 | 孵育時每步均使用新的封板膠紙,避免在環(huán)境溫度變化大的地方孵育,勿疊放反應板 |
小鼠白細胞介素-2ELISA試劑盒訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預訂,海外期貨則需要提前3-6周預訂。
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當日新價格為準。
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后,將底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
ELISA試劑盒運輸說明:
極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。