土壤過氧化氫酶（S-CAT）活性檢測試劑盒說明書 詳見附件
紫外分光光度法
貨號：BC0100
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中，使用前需將EP管先離心。臨用前取0.05 mL試劑一加入9.95mL蒸餾水稀釋待用或者按比例配制。用不完的試劑2-8℃保存1周。

2. 試劑二：臨用前加入2 mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑2-8℃保存4周。

產(chǎn)品說明：
S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類，在H₂O₂清除系統(tǒng)中具有重要作用。
H₂O₂在240nm下有特征吸收峰，通過測定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長下吸光度的變化，即可反應(yīng)S-CAT活性的高低。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、蒸餾水、研缽、30~50目篩和蒸餾水。
 

• 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
二、測定步驟

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至240nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 加樣表（1.5ml EP管）：

混勻，240nm處記錄各管吸光值A。（每個測定管要設(shè)一個無基質(zhì)管，無土管只要做1-2管）
三、S-CAT活力的計算
單位的定義：每天每g風(fēng)干土樣催化1mmol H₂O₂降解定義為一個酶活力單位。
計算公式：S-CAT（U/g 土樣）=[(A無土管-A測定管+A無基質(zhì)管)×V反總÷（ε×d）×10³]÷W÷T
=18.9×（A無土管-A測定管+A無基質(zhì)管）
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.145×10^-3L；ε：過氧化氫摩爾消光系數(shù)，43.6 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm； T：反應(yīng)時間，20min=1/72d；W：樣本質(zhì)量，0.1g。
注意事項：
如果吸取的上清仍有部分渾濁，可以在加入試劑三后統(tǒng)一再次進(jìn)行離心。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：
[1] Hou Q, Wang W, Yang Y, et al. Rhizosphere microbial diversity and community dynamics during potato cult ivation[J]. European Journal of Soil Biology, 2020, 98: 103176.
參考文獻(xiàn)：
[1] 楊蘭芳, 曾巧, 李海波, et al. 紫外分光光度法測定土壤過氧化氫酶活性[J]. 土壤通報, 2011, 42(1):207-210.
[2] Johansson L H, Borg L A H. A spectrophotometric method for determination of catalase activity in small tissue samples[J]. Analytical biochemistry, 1988, 174(1): 331-336.
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