谷*酰胺合成酶（GS）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0915
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
試劑三：臨用前取一瓶加入5mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝可保存4周，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品說明：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷*酸合成谷*酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性，而且谷*酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。
GS在ATP和Mg²⁺存在下，催化銨離子和谷*酸合成谷*酰胺；谷*酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ-谷氨酰基異羥肟酸，在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物；該絡(luò)合物在540nm處有最大吸收峰，可用分光光度計測定。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

實驗實例：

1. 稱取0.125g 小鼠腎臟，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算?A=A測定-A對照=0.228-0.07=0.158，帶入公式計算：

GS（U/g 質(zhì)量）=38×ΔA÷W =48.032 U/g 質(zhì)量。

1. 稱取0.110g 小鼠肝臟，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算?A=A測定-A對照=0.76-0.067=0.693，帶入公式計算：

GS（U/g 質(zhì)量）=38×ΔA÷W =239.4 U/g 質(zhì)量。

1. 稱取0.158g 黃豆芽，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算?A=A測定-A對照=0.142-0.089=0.053，帶入公式計算：

GS（U/g 質(zhì)量）=38×ΔA÷W =12.747 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Zhao B, Tian M, An Q, et al. Characteristics of a heterotrophic nitrogen removal bacterium and its potential application on treatment of ammonium-rich wastewater[J]. Bioresource technology, 2017, 226: 46-54.

2. Su Yilu,Zhou Zhi,Yu Xiaopeng．Possible roles of glutamine synthetase in responding to environmental changes in a scleractinian coral[J]．Molecular biology reports,2018,45(6).

3. Fei Ding,Qiannan Hu,Meiling Wang,Shuoxin Zhang．Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants[J]．International Journal of Molecular Sciences,1999,19(12):4046.

4. Jie Wang,Wei Zhou,Hui Chen,Jiao Zhan,Chenliu He,Qiang Wang．Ammonium Nitrogen Tolerant Chlorella Strain Screening and Its Damaging Effects on Photosynthesis[J]．other,-1,9(-1):3250.

5. Shan Li,Yonghang Tian,Kun Wu,Yafeng Ye,Jianping Yu,Jianqing Zhang,Qian Liu,Mengyun Hu,Hui Li,Yiping Tong,Nicholas P. Harberd,Xiangdong Fu．Modulating plant growth-metabolism coordination for sustainable agriculture[J]．other,-1,560(7720):595–600.

參考文獻(xiàn)：

1. Haghighat N. Estrogen (17β-Estradiol) enhances glutamine synthetase activity in C6-glioma cells[J]. Neurochemical research, 2005, 30(5): 661-667.

2. Bressler S L, Ahmed S I. Detection of glutamine synthetase activity in marine phytoplankton: optimization of the biosynthetic assay[J]. Mar. Ecol. Prog. Ser, 1984, 14: 207-217

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