胃*白酶活性檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

貨號：BC2320

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前加入25 mL試劑二，充分溶解；

2、 試劑三：臨用前加入25 mL蒸餾水，充分溶解。

產(chǎn)品說明：

胃*白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃*白酶分泌的減少。

胃*白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物*氨酸在275nm下有特征吸收峰。通過測定吸光值的變化來計算酶活。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

稱取約0.1g組織加入1mL提取液進行冰浴勻漿或者0.1mL胃液加入0.9mL提取液。10000 rpm 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟

1、 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至275nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表：

注意：對照管后加樣本，而測定管先加樣本

三、 胃*白酶活性計算

1、按樣本蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。

胃*白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（Cpr×V樣本）÷T=0.786×?A÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。

胃*白酶酶活（U/g 質(zhì)量）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（W×V樣本÷V提）÷T=0.786×?A÷W

3、按液體體積計算

    活性單位定義：37℃下每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。

胃*白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（V樣本÷V提×V液）÷T=7.86×?A

Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；W：樣本質(zhì)量，g；V反總：反應(yīng)總體積，1.1mL；V提：提取液體積，1mL；T：催化反應(yīng)時間，10min；V樣本：加入樣本體積，0.1mL；ε：*氨酸吸光系數(shù)，1.4mL/μmol/cm；d：光程，1cm；V液：液體體積，0.1mL。

實驗實例：

1、 取0.1g小鼠胃加入1mL提取液充分研磨，10000rpm 4℃離心10分鐘，取上清稀釋2倍，置冰上，按照測定步驟操作，測得計算?A=A測定-A對照=1.234-1.199=0.035，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

胃*白酶酶活（U/g 質(zhì)量）=0.786 ×?A ÷ W × 2（稀釋倍數(shù)）=0.5502 U/g 質(zhì)量。

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