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| 品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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| 分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
| 分子量 | 詳詢 | 貨號(hào) | BC5080 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 主要用途 | β-羥丁酸含量檢測(cè) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
β-羥丁酸（β-HB）含量檢測(cè)試劑盒（WST法）說(shuō)明書
可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào)：BC5080
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體70mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
顯色液 | 液體4mL×1瓶 | -20℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前取一支加入1.5mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復(fù)凍融。
2、 試劑三：臨用前取一支加入400μL蒸餾水（約40T），充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存，可以保存2周。避免反復(fù)凍融。
3、 標(biāo)準(zhǔn)品：8mg 3-羥基丁酸鈉。臨用前加入980μL蒸餾水，充分溶解，即8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。4℃保存1個(gè)月。
4、 工作液配制：臨用前根據(jù)試驗(yàn)所需量將試劑一、試劑二、試劑三按照850:40:10（共900μL，1T的量）的比例配成工作液，充分混勻，置于37℃保溫15min（此步驟不可省略），現(xiàn)用現(xiàn)配，工作液在4h內(nèi)用完。
產(chǎn)品說(shuō)明：
β-羥丁酸（β-HB），在嚴(yán)重酸中毒患者體內(nèi)，由于酸中毒使患者體內(nèi)NADH生成增加，進(jìn)而促使β-羥丁酸與乙酰乙酸的比值自正常的2:1提高至16:1。β-羥丁酸在檢測(cè)糖尿病酮癥酸中毒診斷、治療中有重要意義，對(duì)糖尿病的早期診斷也有重要意義。本試劑盒適用于血清、血漿、尿液等樣本。
在pH8.8和37℃條件下，β-HB在β-羥丁酸脫氫酶（HBDH）催化下脫氫生成乙酞乙酸，同時(shí)NAD+被還原成NADH；在1-mPMS作用下，WST-1可與NADH反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰。通過(guò)檢測(cè)450nm下波長(zhǎng)變化，可計(jì)算出β-HB的含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、 適用樣本
血清、血漿、尿液等樣本，直接檢測(cè)即可，若溶液有渾濁可離心后進(jìn)行測(cè)定
二、測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：將8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水稀釋至0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。
3、 按下表步驟加樣：
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
樣本 | 100 | 100 | ||
蒸餾水 | 100 | |||
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | 100 | |||
工作液 | 900 | 900 | 900 | |
試劑一 | 900 | |||
37℃條件下反應(yīng)10 min | ||||
顯色液 | 50 | 50 | 50 | 50 |
37℃條件下避光反應(yīng)20 min | ||||
于450 nm處測(cè)定吸光度。分別記為A測(cè)定、A對(duì)照、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白?？瞻坠苤恍枳?/span>1-2次；標(biāo)準(zhǔn)曲線只需做1-2次。 | ||||
三、β-HB含量計(jì)算
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)（x，mg/mL），以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程y=kx+b，將ΔA測(cè)定帶入方程求得x（mg/mL）。
2、 計(jì)算公式
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
β-HB含量（μmol /mg prot）=x×V樣÷（V樣×Cpr）÷126.09×1000=7.931x÷Cpr
（2）按照血清（漿）體積計(jì)算
β-HB含量（μmol /mL）=x×V樣÷V樣÷126.09×1000=7.931x
V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，100 μL=0.1 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；126.09：β-羥基丁酸鈉分子量，mg/mmol；1000：1mmol=1000μmol。
注意事項(xiàng)：
1、顯色完成后，請(qǐng)?jiān)?/span>10 min之內(nèi)完成檢測(cè)。
2、如果ΔA測(cè)定低于或超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光值范圍，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1. 取100μL 牛血清按上述步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用1mL玻璃比色皿測(cè)定后進(jìn)行計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.585- 0.057= 0.528，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.7905x+0.0221，的x=0.640。計(jì)算
β-HB含量（μmol /mL）=7.931x=5.076 μmol /mL
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