NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶（NAD-MDH）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
紫外分光光度法
貨號(hào)：BC1040
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入360 μL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存；

2. 試劑三：臨用前加入327 μL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。

具體操作步驟詳和產(chǎn)品說(shuō)明 見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件

需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。

注意事項(xiàng)：

1. 粗酶液的提取必須在0℃- 4℃中操做完成，以防止酶變性失活。

2. 實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活。

3. 當(dāng)初始讀值小于0.7或者ΔA大于0.5時(shí)建議稀釋后測(cè)量。

4. 建議一人加樣一人比色。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.05g大鼠肝臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定=0.917-0.293=0.624，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.789-0.784=0.005，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得： NAD-MDH（U/g 質(zhì)量）=6431×(ΔA測(cè)定-ΔA空白) ÷W=6431×0.619 ÷0.05=79616 U/g 質(zhì)量。

2. 取0.05g柳樹(shù)葉加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定=0.812-0.741=0.071，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.789-0.784=0.005，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活： NAD-MDH（U/g 質(zhì)量）=6431×(ΔA測(cè)定-ΔA空白) ÷W=6431×0.066 ÷0.05=8489 U/g 質(zhì)量。

3. 取20μL小鼠血漿直接按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定=0.855-0.789=0.066，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.789-0.784=0.005，按血清/血漿體積計(jì)算酶活得： NAD-MDH（U/mL）=6431×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)=6431×0.061=392 U/mL。

參考文獻(xiàn)：

1. Yao Y X, Li M, Zhai H, et al. Isolation and characterization of an apple cytosolic malate dehydrogenase gene reveal its function in malate synthesis[J]. Journal of plant physiology, 2011, 168(5): 474-480.

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