己糖激酶（HK）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
貨號(hào)：BC0745
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二B；臨用前加入12mL試劑一溶解，用不完的試劑2-8℃分裝保存4周；

2. 試劑二C：臨用前加入4mL試劑一溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

3. 試劑二D：臨用前加入4mL試劑一溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

4. 試劑二的配制：根據(jù)樣本量按試劑二A：試劑二B：試劑二C：試劑二D =100μL：500μL：150μL：150μL（5T）的比例配制成試劑二，現(xiàn)用現(xiàn)配；

5. 試劑三：臨用前取1支，加入0.5 mL試劑一，充分溶解；用不完的試劑-20℃保存2周，避免反復(fù)凍融。（該試劑為凍干試劑，可能存在肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象，此現(xiàn)象不影響使用，實(shí)際質(zhì)量相同。）

產(chǎn)品說(shuō)明：
HK（EC 2.7.1.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是葡萄糖分解過(guò)程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH 在340nm有特征吸收峰。
Glucose + ATP                 Glucose-6-Phosphate + ADP
Glucose-6-Phosphate + NADP                                  6-Phosphogluconolactone + NADPH (340nm)
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：


紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

2. 最好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3. 不同勻漿組織中HK 活力不一樣，做正式試驗(yàn)之前請(qǐng)做1-2次預(yù)試驗(yàn)，若ΔA>0.5，則說(shuō)明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液，或縮短反應(yīng)時(shí)間至2min，使ΔA<0.5，以提高檢測(cè)靈敏度。注意同步修改計(jì)算公式。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 
   

1. 
   

2. 稱取約0.0508g 鼠肝，加入1mL提取液，進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。之后按照測(cè)定步驟操作，用96孔UV板測(cè)得計(jì)算A1=0.183，A2=0.428，ΔA=A2-A1=0.245，計(jì)算己糖激酶活性得：HK活性（U/g 質(zhì)量）=1071.7×ΔA÷W=5168.632U/g 質(zhì)量

3. 
   

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Geng M T, Yao Y, Wang Y L, et al. Structure, expression, and functional analysis of the hexokinase gene family in cassava[J]. International journal of molecular sciences, 2017, 18(5): 1041.

2. Zhou F, Du J, Wang J. Albendazole inhibits HIF-1α-dependent glycolysis and VEGF expression in non-small

cell lung cancer cells[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2017, 428(1-2): 171-178.

1. Liu Y, Liang X, Zhang G, et al. Galangin and pinocembrin from propolis ameliorate insulin resistance in HepG2 cells via regulating Akt/mTOR signaling[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2018, 2018.

2. Jing Li,Yabing Duan,Chuanhong Bian,et al. Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance. Pesticide Biochemistry and Physiology. January 2019;153:152-160.(IF2.87)

參考文獻(xiàn)：

1. Pancera S M, Gliemann H, Schimmel T, et al. Adsorption behavior and activity of hexokinase[J]. Journal of colloid and interface science, 2006, 302(2): 417-423.

2. [1] Galina A, da Silva WS. Hexokinase activity alters sugar-nucleotide formation in maize root homogenates[J]. Phytochemistry, 2000, 53(1): 29-37.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0540/BC0545 丙 酮酸激酶（PK）活性檢測(cè)試劑盒
BC0530/BC0535 磷酸果糖激酶（PFK）活性檢測(cè)試劑盒
BC2190/BC2195 磷酸烯醇式丙 酮酸羧化酶（PEPC）活性檢測(cè)試劑盒
 

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