TBS緩沖液是Tris-HCl緩沖鹽溶液,為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液。屬于常規(guī)pH緩沖液,常用于清洗免疫染色的組織或Western?Blot?中的蛋白印跡膜等,是常用分子生物學(xué)試劑。TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)主要由Tris、氯化鈉、BSA、防腐劑等組成,可用于免疫金銀染色中清洗組織,亦可作為封閉液的基礎(chǔ)試劑。
Tris緩沖鹽水(TBS):10mmol/L,Tris含0.9%NaCl,用1N HC1調(diào)pH7.4;
操作步驟(僅供參考):
1、石蠟切片脫蠟水。
2、胰蛋白酶消或3M尿素消化。
3、蒸餾水沖洗2次。
4、TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)振蕩洗滌2次,每次5~10min。
5、進(jìn)行封閉及下游其他實(shí)驗(yàn)。
一、TBS的配制
0.05 M TBS ( pH7.4 ) 的配制:
Tris (三羥甲基胺基甲烷 )12.1g
NaCl17.5g
加蒸餾水1500ml
磁性攪拌下滴加濃HClpH為7.4,再加蒸餾水2000ml,即可。
如需含1% Triton X-100,則在滴加HCl前先加入20ml Triton X-100。
二、THB的配制
A液 ( 0.2 M Tris ):( MW 121.14 ) 稱取2.428克 Tris,溶于100毫升蒸餾水中。
B液 ( 0.1 N HCl): 取37% HCl ( 比重1:19 ) 0.84毫升,加入蒸餾水中,使成100毫升。
不同pH ( 7.19 ~ 9.10 ) 的0.05 M THB配制:按下表,取A液25ml加B液Xml,補(bǔ)加蒸餾水100ml。
B=X pH B=X pH
45.0 7.19 25.0 8.14
42.5 7.36 22.5 8.23
41.4 7.40 20.0 8.32
40.0 7.54 17.5 8.41
38.4 7.60 15.0 8.51
37.5 7.66 12.5 8.62
35.0 7.77 10.0 8.74
32.5 7.87 7.5 8.92
30.0 7.96 5.0 9.10
27.5 8.05
免疫組織化學(xué)中,常用pH7.6的THB
北京索萊寶科技有限公司是一家集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售、服務(wù)于一體的高科技生物企業(yè)。產(chǎn)品主要涵蓋生化試劑、分子生物學(xué)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)、免疫學(xué)產(chǎn)品及實(shí)驗(yàn)耗材等。20×TBS為索萊寶自產(chǎn)產(chǎn)品,其貨號(hào)為T(mén)1080。TBS 緩沖液是生物學(xué)中常使用的等滲緩沖鹽溶液,主要用于免疫組化和原位雜交,酶聯(lián)免疫等實(shí)驗(yàn)中,清 洗免疫印跡實(shí)驗(yàn)中非特異性結(jié)合的抗體等。